分离纯化的目的是去除粗提物中的其他杂质，获得一定纯度的目标产物。

小试纯化工艺放大至生产规模时，耀海生物团队会判断工艺稳定性或设备差异对工艺过程及产物的影响。我们建议在小试与GMP生产的转移过程中，增加中试放大的环节，以验证纯化工艺的稳定性和可行性，并对工艺参数加以调整使其高度契合生产规模。

层析是质粒DNA捕获、中度纯化和精度纯化的重要工艺之一。耀海生物可提供中试规模的质粒DNA层析纯化服务，满足质粒经典三步法层析：凝胶过滤层析（分子筛, SEC）、嗜硫亲和层析（AC）、阴离子交换层析（IEX），以及其他定制化层析工艺的中试放大需求，目的是高效捕获超螺旋质粒，去除HCP、HCD与内毒素等残留物质。

耀海生物具有十余年微生物体系质粒DNA和重组蛋白生产及服务经验，我们能够快速识别并控制关键参数，成功实现层析等纯化工艺的放大。

服务详情

纯化工艺放大前后的差异

纯化工艺放大经验分享

纯化放大生产时，第一步的过滤澄清必不可少。澄清的目的是进一步去除颗粒物质、避免对下游纯化的不利影响，通常使用中空纤维或膜包完成，工艺转移或放大过程中的关键参数包括处理批量、膜面积和流速。

层析纯化，即采用不同的层析填料，将不同大小、电荷、极性和特异性的杂质去除，得到高纯度目的产物的过程。

经典的质粒纯化三步法层析为：

第一步通过分子筛/凝胶过滤层析（SEC）去除RNA；

第二步亲和层析（AC）捕获超螺旋质粒；

最后一步阴离子交换层析（ICX）去除内毒素。

层析工艺转移中的关键参数包括：处理批量、柱体积、上样体积和流速。

耀海生物生产团队基于丰富的质粒生产服务经验，总结了纯化工艺转移和放大过程中的常见问题和放大策略：